高中生物知識點總結(jié)(選修部分)

選修要點總結(jié)

90、穩(wěn)態(tài)：神經(jīng)系統(tǒng)和體液調(diào)節(jié)下，內(nèi)環(huán)境的相對穩(wěn)定

溫度、PH、滲透壓，水、無機(jī)鹽、血糖等化學(xué)物質(zhì)含量

血漿7.357.45緩沖對NaHCO3/H2CO3Na2HPO4/NaH2PO42/3細(xì)胞內(nèi)液組織液

91、65%體液1/3細(xì)胞外液血漿淋巴

（內(nèi)環(huán)境）不是血液血液>血漿>血清食物排尿

92、體內(nèi)水來源飲水水排出途徑出汗皮膚代謝水（有氧呼吸）面蟲、駱駝呼氣肺

（氨基酸脫水縮合）排遺消化道

93、K不吃也排不經(jīng)過出汗排

腎上腺分泌醛固酮（固醇）保Na排K高溫工作、重體力勞動、嘔吐、腹瀉→→應(yīng)特別注意補(bǔ)充足夠的水、Na（食鹽）細(xì)胞外液滲透壓下降，出現(xiàn)四肢發(fā)冷、血壓下降、心率加快

K對細(xì)胞內(nèi)液細(xì)胞滲透壓起決定作用，維持心肌緊張、心肌正常興奮性K心94、血糖三來源（食物、分解、轉(zhuǎn)化）三去向糖的主要功能：供能

胰島素唯一降血糖激素；增加糖的去路，減少糖的來源胰高血糖素、腎上腺素升血糖

胰高血糖素促進(jìn)胰島素分泌，胰島素卻抑制胰高血糖素分泌血糖升高↓↑↑

下丘腦某區(qū)域→胰島B細(xì)胞胰高血糖素↑腎上腺素↑

↓↑↑

胰島素↑胰島A細(xì)胞腎上腺髓質(zhì)↓↑↑下丘腦另一區(qū)域血糖降低160-180糖尿

一次性攝糖過多，暫時尿糖持續(xù)糖尿不一定糖尿病，如腎炎重吸收不行糖尿病血糖高且有糖尿驗?zāi)蝌炑�三多一少癥狀？不吃少吃多吃含膳食纖維多的粗糧和蔬菜95、營養(yǎng)物質(zhì)：

蛋白質(zhì)不足：嬰幼兒、兒童、少年生長發(fā)育遲緩、體重過輕成年人浮腫提供能量

營養(yǎng)物質(zhì)功能提供構(gòu)建和修復(fù)機(jī)體組織的物質(zhì)提供調(diào)節(jié)機(jī)體生理功能的物質(zhì)

維生素：維持機(jī)體新陳代謝、某些特殊生理功能

生物高考復(fù)習(xí)要點記憶手冊第1頁

VA：夜盲癥維生素VB：腳氣病VC：壞血病

VD：佝僂病、骨軟化病、骨質(zhì)疏松癥

96、溫度感受器分為冷覺感受器和溫覺感受器（分布皮膚、粘膜、內(nèi)臟器官）

體溫來自代謝釋放熱量（不是ATP提供），體溫恒定是產(chǎn)熱量，散熱量動態(tài)平衡結(jié)果

寒冷炎熱

↓↓

皮膚冷覺感受器溫覺感受器血管

↓傳入神經(jīng)↓立毛肌

下丘腦體溫調(diào)節(jié)中樞下丘腦骨骼肌傳出神經(jīng)↓汗皮膚血管收縮骨骼肌戰(zhàn)粟（產(chǎn)能特多）血管舒張

皮膚立毛肌收縮皮膚立毛肌收縮汗液分泌增多↓雞皮疙瘩腎上腺素↑縮小汗毛孔甲狀泉激素↑

減少散熱增加產(chǎn)熱散熱量增加不能減少產(chǎn)熱

調(diào)節(jié)水分、血糖、體溫

97、下丘腦分泌激素：促激素釋放激素抗利尿激素感受刺激：下丘腦滲透壓感受器傳導(dǎo)興奮：產(chǎn)生渴覺

第一道防線：皮膚、粘膜等

非特異性免疫（先天免疫）第二道防線：體液中殺菌物質(zhì)、吞噬細(xì)胞

98、免疫特異性免疫（獲得性免疫）第三道防線：體液免疫和細(xì)胞免疫在特異性免疫中發(fā)揮免疫作用的主要是淋巴細(xì)胞淋巴細(xì)胞的起源和分化：胸腺─T骨髓─B免疫細(xì)胞：B、T

免疫系統(tǒng)的物質(zhì)基礎(chǔ)免疫器官：扁桃體、淋巴結(jié)、脾

免疫物質(zhì)：抗體、淋巴因子（白介素、干擾素）

99、抗原特點：①一般異物性但也有例外：如癌細(xì)胞、損傷或衰老的細(xì)胞

②大分子性

③特異性抗原決定簇（病毒的衣殼）

100、體液免疫：記憶細(xì)胞

↓↓再次受相同抗原刺激抗原→→吞噬細(xì)胞→→T細(xì)胞→→B細(xì)胞→→→效應(yīng)B細(xì)胞→→→抗體↑（攝取處理）（呈遞）（識別）感應(yīng)階段反應(yīng)階段效應(yīng)階段

效應(yīng)B細(xì)胞產(chǎn)生：抗體(免疫球蛋白)、抗毒素、凝集素效應(yīng)T細(xì)胞產(chǎn)生：淋巴因子、干擾素、白細(xì)胞介素識別抗原：B細(xì)胞、效應(yīng)T細(xì)胞、記憶B/T

效應(yīng)B細(xì)胞獲得有三途徑（直接、間接、記憶）

生物高考復(fù)習(xí)要點記憶手冊第2頁記憶細(xì)胞受相同抗原再次刺激后引起的二次免疫反應(yīng)：更迅速、更強(qiáng)再次接受過敏原（概念）過敏反應(yīng)抗體分布細(xì)胞表面組織胺：體液調(diào)節(jié)

101、免疫失調(diào)引起的疾病自身免疫疾病：風(fēng)濕類風(fēng)濕系統(tǒng)性紅斑狼瘡先天性：先天性胸腺發(fā)育不全免疫缺陷病獲得性：艾滋病、肺炎、氣管炎（人類免疫缺陷病毒）HIV↓攻擊T細(xì)胞（AIDS）獲得性免疫缺陷綜合癥102、色素吸收、傳遞、轉(zhuǎn)換光能色素不能儲存光能

蛋白質(zhì)、氨基酸也不能儲存少數(shù)特殊狀態(tài)葉綠素a最終電子供體：水高能量、易失電子光能→電能最終電子受體:NADP+103、C4植物：玉米、高梁、甘庶、莧菜

既C3又C4CO2固定能力強(qiáng)先CO2+C3→C4C3、C4葉肉細(xì)胞都含正常葉綠體選修C3維管束鞘細(xì)胞無葉綠體

圖C4維管束鞘細(xì)胞含無基粒的葉綠體不進(jìn)行光反應(yīng)

(P29)C4植物花環(huán)型結(jié)構(gòu)里圈：維管束鞘細(xì)胞外圈：部分葉肉細(xì)胞降低呼吸消耗增加凈光合量

104、提高產(chǎn)量延長光合作用時間光：光質(zhì)、強(qiáng)度、長短提高農(nóng)作物對增大光合作用面積溫度：影響酶的活性光能利用率提高光合作用效率水

礦質(zhì)元素N、P、K、MgCO2農(nóng)家肥、CO2發(fā)生器105、生物固氮：N2→NH3

根瘤菌的特異性：蠶豆根瘤菌侵入蠶豆、菜豆、豇豆；大豆根瘤菌侵入大豆。N素

根瘤菌有機(jī)物豆科植物異養(yǎng)需氧共生固氮菌根瘤薄壁細(xì)胞愈傷組織

固氮菌自生≠自養(yǎng)根瘤菌拌種豆科植物綠肥自生固氮菌：圓褐固氮菌（固氮+激素）

生物固氮（主：根瘤菌）工業(yè)固氮高能固氮106、N循環(huán)硝化、反硝化、氨化作用

-反硝化：氧氣不足NO3→N2

自生固氮菌的分離原理：無氮培養(yǎng)基對固氮菌的選擇生長物質(zhì)基礎(chǔ)：線粒體、葉綠體中的DNA（質(zhì)基因）線粒體

107、細(xì)胞質(zhì)遺傳典型代表葉綠體花斑植株→三種特點母系遺傳（受精卵中的細(xì)胞質(zhì)幾乎全來自卵細(xì)胞）．．后代性狀不出現(xiàn)一定分離比

生物高考復(fù)習(xí)要點記憶手冊第3頁（形成配子時，質(zhì)基因不均等分配）

編碼區(qū)：編碼蛋白質(zhì)連續(xù)的

原核細(xì)胞非編碼區(qū)編碼區(qū)上游：RNA聚合酶結(jié)合位點基因結(jié)構(gòu)調(diào)控編碼區(qū)下游

108、基因的結(jié)構(gòu)真核細(xì)胞非編碼區(qū)

基因結(jié)構(gòu)編碼區(qū)內(nèi)含子：非編碼序列外顯子：能編碼蛋白質(zhì)內(nèi)含子>外顯子原核基因無外顯子內(nèi)含子之說

主要分布于微生物

剪刀：限制性內(nèi)切酶特異性（專一性）（200多種）獲得粘性末端

109、基因的操作工具針線：DNA連接酶：扶手（磷酸二脂鍵）不是踏板（氫鍵）

條件①復(fù)制保存②多切點③標(biāo)記基因種類：質(zhì)粒、病毒

運輸工具：運載體①染色體外小型環(huán)狀DNA②存在于細(xì)菌、酵母菌質(zhì)粒特點③質(zhì)粒是常用的運載體

④最常用：大腸桿菌

⑤對宿主細(xì)胞的生存無

基因工程(基因拼接技術(shù)、DNA重組技術(shù)、轉(zhuǎn)基因技術(shù))決定性作用

直接分離常用鳥槍法提取目的基因人工合成（反轉(zhuǎn)錄法、根據(jù)已知AA序列合成DNA）目的基因與運載體結(jié)合同一種限制酶．．．110、基因操作步驟將目的基因?qū)�入受體細(xì)胞→細(xì)菌、酵母菌、動植物．．．．CaCl2處理細(xì)胞壁（受精卵好繁殖速度快）

目的基因的檢測和表達(dá)：標(biāo)記基因、目的基因是否表達(dá)？逆轉(zhuǎn)錄堿基互補(bǔ)配對

mRNA單鏈DNA雙鏈DNA推測推測合成

氨基酸序列mRNA序列DNA堿基序列目的基因藥（胰島素、干擾素、白細(xì)胞介素、乙肝疫苗）111、基因工程的成果治�。夯�因診斷與基因治療（基因替換）新品種（轉(zhuǎn)基因）食品工業(yè)（食物）環(huán)境監(jiān)測（DNA分子雜交探針）

生物固氮、基因診斷、基因治療、單細(xì)胞蛋白（微生物菌體本身）、

單克隆抗體、生物導(dǎo)彈（單抗+抗癌藥物）

112、間接聯(lián)系核心核膜

高爾基體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)細(xì)胞膜線粒體膜

間接（具膜小泡）（內(nèi)吞外排說明雙向）分泌蛋白：抗體、蛋白質(zhì)類激素、胞外酶（消化酶）等分泌到細(xì)胞外

粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)上的核糖體內(nèi)質(zhì)網(wǎng)運輸加工高爾基體加工成熟蛋白質(zhì)胞外

生物高考復(fù)習(xí)要點記憶手冊第4頁113、生物膜系統(tǒng)（不等于生物膜）：細(xì)胞膜、核膜及由膜圍繞而成的細(xì)胞器離體→營養(yǎng)物質(zhì)+激素適宜溫度+無菌

植物組織培養(yǎng)離體→愈傷組織→根芽（胚狀體）→植物體選無病毒尖（生長點）紫草素114、植物細(xì)胞工程兩種不同→雜種細(xì)胞→新植物體

植物體細(xì)胞去掉細(xì)胞壁→原生質(zhì)體→雜種細(xì)胞→新植物體雜交種間存在生殖隔離不能有性雜交

好處：克服遠(yuǎn)源雜交不親和障礙培育新品種是其它動物細(xì)胞工程技術(shù)的基礎(chǔ)動物細(xì)胞培養(yǎng)液體培養(yǎng)基：動物血清

115、動取自動物胚胎或出生不久的幼齡動物的器官或組織物用胰蛋白酶處理細(xì)原代培養(yǎng)→傳代培養(yǎng)（細(xì)胞株→細(xì)胞系遺傳物質(zhì)發(fā)生改變）胞滅活的病毒做誘導(dǎo)劑+物理、化學(xué)方法

工動物細(xì)胞融合最重要用途：制備單克隆抗體程理論基礎(chǔ)：細(xì)胞膜的流動性

單克隆抗體→指單個B淋巴細(xì)胞經(jīng)克隆形成的細(xì)胞群產(chǎn)生的化學(xué)性質(zhì)單一、

特異性強(qiáng)的抗體（優(yōu)點：特異性強(qiáng)、靈敏度高）。每一個B淋巴細(xì)胞只分泌一種特異性抗體（共百萬種）*雜交瘤細(xì)胞*生物導(dǎo)彈

116、微生物包含了除植物界和動物界以外的所有生物

質(zhì)粒（小型環(huán)狀DNA）控制抗藥性、固氮、抗生素生成

核區(qū)（大型環(huán)狀DNA）控制主要遺傳性狀有的細(xì)菌有莢膜、芽孢、鞭毛碳源：無機(jī)/有機(jī)碳源自養(yǎng)/異養(yǎng)117、微生物生長氮源：加不加額外的氮源所需的營養(yǎng)物質(zhì)生長因子：（維生素、氨基酸、堿基→構(gòu)成酶和核酸）水：無機(jī)鹽：

固體培養(yǎng)基：分離、鑒定、計數(shù)物理性質(zhì)半固體培養(yǎng)基：運動、保藏菌種液體培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)

118、培養(yǎng)基天然培養(yǎng)基：工業(yè)生產(chǎn)

化學(xué)性質(zhì)合成培養(yǎng)基：分類鑒定

選擇培養(yǎng)基青霉素→選出酵母菌、霉菌等真菌

用途NaCl：金黃色葡萄球菌

鑒定培養(yǎng)基：伊紅美藍(lán)→大腸桿菌→深紫色和金屬光澤

自己設(shè)計實驗：把混合在一起的圓褐固氮菌、硝化細(xì)菌、大腸桿菌區(qū)分開，并篩選純種。

酶合成的調(diào)節(jié)誘導(dǎo)酶：基因和誘導(dǎo)物控制119、微生物代謝調(diào)節(jié)酶活性的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)改變可逆快速準(zhǔn)確

必需物質(zhì)，一直產(chǎn)生氨基酸、核苷酸、維生素初級代謝產(chǎn)物無種的特異性多糖、脂類120、代謝產(chǎn)物非必需物質(zhì)，一定階段抗生素、毒素

生物高考復(fù)習(xí)要點記憶手冊第5頁次級代謝產(chǎn)物有種的特異性四素色素、激素

121、微生物群體生長曲線：3241

（1）調(diào)整期：代謝活躍，開始合成誘導(dǎo)酶初級代謝產(chǎn)物收獲的最佳時期（2）對數(shù)期：形態(tài)和生理特性穩(wěn)定，代謝旺盛；科研用菌種，接種最佳時期（3）穩(wěn)定期：次級代謝產(chǎn)物收獲最佳時期，芽孢生成（種內(nèi)斗爭最劇烈）及時補(bǔ)充營養(yǎng)物質(zhì)，可以延長穩(wěn)定期

（4）衰亡期：多種形態(tài)，出現(xiàn)畸形，釋放次級代謝產(chǎn)物生存環(huán)境惡劣與無機(jī)環(huán)境斗爭最激烈的是4衰亡期。

營養(yǎng)物質(zhì)消耗有害代謝產(chǎn)物積累PH不適宜導(dǎo)致3.4時期的出現(xiàn)。注意：前三個時期類似“S”型增長曲線，但是多了衰亡期122、影響微生物生活的環(huán)境因素

PH值：影響酶的活性、細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，從而影響微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的吸收

溫度：影響酶和蛋白質(zhì)的活性O(shè)2濃度：產(chǎn)甲烷桿菌

123、高壓蒸汽滅菌法：1/5、1/2、2/3、75%由里向外、細(xì)密、不重復(fù)溶化后分裝前必須要調(diào)節(jié)pH細(xì)菌培養(yǎng)的過程：培養(yǎng)基的配制→滅菌→擱置斜面→接種→培養(yǎng)觀察實例：谷氨酸發(fā)酵（黃色短桿菌、谷氨酸棒狀桿菌）概念：

菌種選育：誘變育種、基因工程、細(xì)胞工程培養(yǎng)基的配制：成分、比例，pH適宜124、發(fā)酵工程內(nèi)容滅菌：去除雜菌

擴(kuò)大培養(yǎng)和接種：菌種多次培養(yǎng)達(dá)到一定數(shù)量

發(fā)酵過程：（中心階段）控制各種條件，生產(chǎn)發(fā)酵產(chǎn)品分離提純菌體：過濾、沉淀（單細(xì)胞蛋白即微生物菌體本身）代謝產(chǎn)物：蒸餾、萃取、離子交換應(yīng)用醫(yī)藥工業(yè)：生產(chǎn)藥品和基因工程藥品

食品工業(yè)：傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品、食品添加劑、單細(xì)胞蛋白等125、C/N=4/1菌體大量繁殖但產(chǎn)生的谷氨酸少(P79)

記住C/N=3/1菌體繁殖受抑制，但谷氨酸的合成量大增溶氧不足：產(chǎn)生乳酸或琥珀酸

pH呈酸性：產(chǎn)生乙酰谷氨酰胺（P95）

生物高考復(fù)習(xí)要點記憶手冊第6頁

擴(kuò)展閱讀：高中生物選修一知識點總結(jié)(201*最新修改版)

高中生物選修一生物技術(shù)實踐知識點總結(jié)

專題一傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)的應(yīng)用課題一果酒和果醋的制作

1、發(fā)酵：通過微生物技術(shù)的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。

2、有氧發(fā)酵：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)酵無氧發(fā)酵：酒精發(fā)酵乳酸發(fā)酵

3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖(主要)分裂生殖孢子生殖4、在有氧條件下，酵母菌進(jìn)行有氧呼吸，大量繁殖。C6H12O6＋6O2→6CO2＋6H2O5、在無氧條件下，酵母菌能進(jìn)行酒精發(fā)酵。C6H12O6→2C2H5OH＋2CO26、20℃左右最適宜酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18℃-25℃

7、在葡萄酒自然發(fā)酵的過程中,起主要作用的是附著在葡萄皮表面的野生型酵母菌.在發(fā)酵過程中,隨著酒精濃度的提高,紅葡萄皮的色素也進(jìn)入發(fā)酵液,使葡萄酒呈現(xiàn)深紅色.在缺氧呈酸性的發(fā)酵液中，酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應(yīng)這一環(huán)境而受到制約。8、醋酸菌是單細(xì)胞細(xì)菌(原核生物),代謝類型是異養(yǎng)需氧型,生殖方式為二分裂

9、當(dāng)氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將葡萄汁中的糖分解成醋酸；當(dāng)缺少糖源時，醋酸菌將乙醇變?yōu)橐胰�，再將乙醛變�(yōu)榇姿帷?C2H5OH＋4O2→CH3COOH＋6H2O10、控制發(fā)酵條件的作用①醋酸菌對氧氣的含量特別敏感，當(dāng)進(jìn)行深層發(fā)酵時，即使只是短時間中斷通入氧氣，也會引起醋酸菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為30～35℃，控制好發(fā)酵溫度，使發(fā)酵時間縮短，又減少雜菌污染的機(jī)會。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物的氧化。

11、實驗流程：挑選葡萄→沖洗→榨汁→酒精發(fā)酵→果酒（→醋酸發(fā)酵→果醋）

12、酒精檢驗：果汁發(fā)酵后是否有酒精產(chǎn)生，可以用重鉻酸鉀來檢驗。在酸性條件下，重鉻酸鉀與酒精反應(yīng)呈現(xiàn)灰綠色。先在試管中加入發(fā)酵液2ｍL，再滴入物質(zhì)的量濃度為3mol/L的H2SO43滴，振蕩混勻，最后滴加常溫下飽和的重鉻酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀察顏色

13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進(jìn)行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時用來排出二氧化碳的；出料口是用來取樣的。排氣口要通過一個長而彎曲的膠管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有利于二氧化碳的排出。使用該裝置制酒時，應(yīng)該關(guān)閉充氣口；制醋時，應(yīng)該充氣口連接氣泵，輸入氧氣。

疑難解答

（1）你認(rèn)為應(yīng)該先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為什么？

應(yīng)該先沖洗，然后再除去枝梗，以避免除去枝梗時引起葡萄破損，增加被雜菌污染的機(jī)會。（2）你認(rèn)為應(yīng)該從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？

如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機(jī)、發(fā)酵裝置要清洗干凈，并進(jìn)行酒精消毒；每次排氣時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。

（3）制葡萄酒時，為什么要將溫度控制在18～25℃？制葡萄醋時，為什么要將溫度控制在30～35℃？

溫度是酵母菌生長和發(fā)酵的重要條件。20℃左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是嗜溫菌，最適生長溫度為30～35℃，因此要將溫度控制在30～35℃。

課題二腐乳的制作

1、多種微生物參與了豆腐的發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起主要作用的是毛霉。毛霉是一種絲狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型。生殖方式是孢子生殖。營腐生生活。

2、原理：毛霉等微生物產(chǎn)生的蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可將脂肪水解為甘油和脂肪酸。

3、實驗流程：讓豆腐上長出毛霉→加鹽腌制→加鹵湯裝瓶→密封腌制4、釀造腐乳的主要生產(chǎn)工序是將豆腐進(jìn)行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。

前期發(fā)酵的主要作用：1.創(chuàng)造條件讓毛霉生長。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。后期發(fā)酵主要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應(yīng)的過程。通過各種輔料與酶的緩解作用，生成腐乳的香氣。

5、將豆腐切成3cm×3cm×1cm的若干塊。所用豆腐的含水量為70％左右，水分過多則腐乳不易成形。*水分測定方法如下：精確稱取經(jīng)研缽研磨成糊狀的樣品5～10g(精確到0.02mg)，置于已知重量的蒸發(fā)皿中，均勻攤平后，在100～105℃電熱干燥箱內(nèi)干燥4h，取出后置于干燥器內(nèi)冷卻至室溫后稱重，然后再烘30min，直至所稱重量不變?yōu)橹�。樣品水分含量�?）計算公式如下：

(烘干前容器和樣品質(zhì)量-烘干后容器和樣品質(zhì)量)/烘干前樣品質(zhì)量

毛霉的生長：條件：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中的控制在15～18℃，并保持一定的溫度。

來源：1.來自空氣中的毛霉孢子，2.直接接種優(yōu)良毛霉菌種時間：5天

加鹽腌制：將長滿毛霉的豆腐塊分層整齊地擺放在瓶中，同時逐層加鹽，隨著層數(shù)的加高而增加鹽量，接近瓶口表面的鹽要鋪厚一些。加鹽腌制的時間約為8天左右。

用鹽腌制時，注意控制鹽的用量：鹽的濃度過低，不足以抑制微生物的生長，可能導(dǎo)致豆腐腐敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會影響腐乳的口味

食鹽的作用：1.抑制微生物的生長，避免腐敗變質(zhì)2.析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程中不易酥爛3.調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶菌絲上的蛋白酶。

配制鹵湯：鹵湯直接關(guān)系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及各種香辛料配制而成的。鹵湯中酒的含量一般控制在12%左右。

酒的作用：1.防止雜菌污染以防腐2.與有機(jī)酸結(jié)合形成酯，賦予腐乳風(fēng)味3.酒精含量的高低與腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很大關(guān)系，酒精含量越高，對蛋白酶的抑制作用也越大，使腐乳成熟期延長；酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加快蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成塊。

香辛料的作用：1.調(diào)味作用2.殺菌防腐作用3.參與并促進(jìn)發(fā)酵過程

防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷干凈后要用沸水消毒。②裝瓶時，操作要迅速小心。整齊地擺放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，最好將瓶口通過酒精燈的火焰，防止瓶口被污染。疑難解答

（1）利用所學(xué)的生物學(xué)知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事？豆腐生長的白毛是毛霉的白色菌絲。嚴(yán)格地說是直立菌絲，在豆腐中還有匍匐菌絲。（2）為什么要撒許多鹽，將長毛的豆腐腌起來？鹽能防止雜菌污染，避免豆腐腐敗。

（3）我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？

含水量為70%左右的豆腐適于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。

（4）吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密的“皮”。這層“皮”是怎樣形成的呢？它對人體有害嗎？它的作用是什么？

“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長的菌絲（匍匐菌絲），對人體無害。它能形成腐乳的“體”，使腐乳成形。

課題三制作泡菜

制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。在無氧條件下，降糖分解為乳

2C3H6O3+能量含抗生素牛奶不能生產(chǎn)酸奶酸。分裂方式是二分裂。反應(yīng)式為：C6H12O6的原因是抗生素殺死乳酸菌。常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。

膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康，國家規(guī)定肉制品中不超過30mg/kg，醬腌菜中不超過20mg/kg，嬰兒奶粉中不超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸收后隨尿液排出體外，但在適宜pH、溫度和一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。亞硝酸鹽含量發(fā)酵時間（d）

專題二微生物的培養(yǎng)與應(yīng)用課題一微生物的實驗室培養(yǎng)

培養(yǎng)基：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，是進(jìn)行微生物培養(yǎng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。

培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基。在液體培養(yǎng)基中加入凝固劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特征可以判斷是哪一種菌。液體培養(yǎng)基應(yīng)用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應(yīng)用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于觀察微生物的運動及菌種保藏等。

按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學(xué)物質(zhì)配制而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物的分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學(xué)成分不明的天然物質(zhì)配制而成，常用于實際工業(yè)生產(chǎn)。

一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開始降低，故在10天之后食用最好

*測定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞硝酸鹽與對氨基苯磺酸發(fā)生重氮化反應(yīng)后，與N-1-萘基乙二胺鹽酸鹽結(jié)合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)顯色液目測比較，估算泡菜中亞硝酸鹽含量。

酶按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基。選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不需要的微生物生長，促進(jìn)所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生物的特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品配制而成的，用以鑒別不同類別的微生物。培養(yǎng)基的化學(xué)成分包括水、無機(jī)鹽、碳源、氮源、生長因子等。

碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO2、NaHCO3等無機(jī)碳源；糖類、石油、花生粉餅等有機(jī)碳源。異養(yǎng)微生物只能利用有機(jī)碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。

氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如N2、NH3、NO3、NH4（無機(jī)氮源）蛋白質(zhì)、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有機(jī)氮源）等。只有固氮微生物才能利用N2。

培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及氧氣的要求。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基的pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細(xì)菌是需要將pH調(diào)至中性或微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件

無菌技術(shù)獲得純凈培養(yǎng)物的關(guān)鍵是防止外來雜菌的入侵，要注意以下幾個方面：

①對實驗操作的空間、操作者的衣著和手，進(jìn)行清潔和消毒。②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等器具進(jìn)行滅菌。③為避免周圍環(huán)境中微生物的污染，實驗操作應(yīng)在酒精燈火焰附近進(jìn)行。④實驗操作時應(yīng)避免已經(jīng)滅菌處理的材料用具與周圍的物品相接觸。

無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么目的？答：無菌技術(shù)還能有效避免操作者自身被微生物感染。消毒與滅菌的區(qū)別

消毒指使用較為溫和的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。消毒方法常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對于一些不耐高溫的液體）還有化學(xué)藥劑（如酒精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

滅菌則是指使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。滅菌方法有灼燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。滅菌方法：

比較項理化因素的作用強(qiáng)度消毒滅菌較為溫和強(qiáng)烈消滅微生物的數(shù)量部分生活狀態(tài)的微生物全部微生物芽孢和孢子能否被消滅不能能①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法；

②玻璃器皿、金屬用具等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

-+

③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。

制作牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基

（1）方法步驟：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。（2）倒平板操作的步驟：

①將滅過菌的培養(yǎng)皿放在火焰旁的桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。

③用左手的拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，右手將錐形瓶中的培養(yǎng)基（約10～20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。

④等待平板冷卻凝固，大約需5～10min。然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底在上。

倒平板操作的討論

1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？

提示：可以用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進(jìn)行倒平板了。

2.為什么需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。3.平板冷凝后，為什么要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結(jié)水珠，凝固后的培養(yǎng)基表面的濕度也比較高，將平板倒置，既可以使培養(yǎng)基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培養(yǎng)基，造成污染。4.在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？

答：空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最好不要用這個平板培養(yǎng)微生物。純化大腸桿菌

（1）微生物接種的方法最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（2）平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作。將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基的表面。在數(shù)次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一個細(xì)胞繁殖而來的肉眼可見的子細(xì)胞群體，這就是菌落。

（3）稀釋涂布平板法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋，然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培養(yǎng)基的表面，進(jìn)行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。

（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使聚集在一起的微生物分散成單個細(xì)胞，從而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。（5）平板劃線法操作步驟：

①將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán)，并打開棉塞。③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。

⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開一條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。重復(fù)以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不要將最后一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連。⑧將平板倒置放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。平板劃線操作的討論

1.為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)嗎？為什么？

答：操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避免接種環(huán)上可能存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后，為什么要等其冷卻后再進(jìn)行劃線？答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為什么總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細(xì)菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細(xì)菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)菌繁殖而來的菌落。（6）涂布平板操作的步驟：

①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。③將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8～10s。④用涂布器將菌液均勻地涂布在培養(yǎng)基表面。涂布平板操作的討論

涂布平板的所有操作都應(yīng)在火焰附近進(jìn)行。結(jié)合平板劃線與系列稀釋的無菌操作要求，想一想，第2步應(yīng)如何進(jìn)行無菌操作？

提示：應(yīng)從操作的各個細(xì)節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿的距離要合適、吸管頭不要接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。菌種的保存

（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的方法。

①臨時保藏方法

將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的溫度下培養(yǎng)。當(dāng)菌落長成后，將試管放入4℃的冰箱中保藏。以后每3～6個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉(zhuǎn)移到新鮮的培養(yǎng)基上。

②缺點：這種方法保存的時間不長，菌種容易被污染或產(chǎn)生變異。（2）對于需要長期保存的菌種，可以采用甘油管藏的方法。

在3mL的甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的菌液轉(zhuǎn)移到甘油瓶中，與甘油充分混勻后，放在－20℃的冷凍箱中保存。疑難解答（1）生物的營養(yǎng)

營養(yǎng)是指生物攝取、利用營養(yǎng)物質(zhì)的過程。營養(yǎng)物質(zhì)是指維持機(jī)體生命活動，保證發(fā)育、生殖所需的外源物質(zhì)。

人及動物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。

微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機(jī)鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。（2）確定培養(yǎng)基制作是否合格的方法

將未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1～2天，無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。

課題二土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸收。只有當(dāng)土壤中的細(xì)菌將尿素分解成氨之后，才能被植物利用。土壤中的細(xì)菌之所以能分解尿素，是因為他們能合成脲酶

尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的

篩選菌株

人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。

（2）選擇性培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。（3）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)

根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點加入某種物質(zhì)以達(dá)到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機(jī)物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。統(tǒng)計菌落數(shù)目

（1）測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細(xì)菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進(jìn)行計數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。

采用此方法的注意事項：1.一般選取菌落數(shù)在30~300之間的平板進(jìn)行計數(shù)2.為了防止菌落蔓延，影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC3.本法僅限于形成菌落的微生物設(shè)置對照

設(shè)置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。對照實驗是指除了被測試的條件以外，其他條件都相同的實驗，其作用是比照試驗組，排除任何其他可能原因的干擾，證明確實是所測試的條件引起相應(yīng)的結(jié)果。實驗設(shè)計

實驗設(shè)計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。

（1）土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)量最大，種類最多。在富含有機(jī)質(zhì)的土壤表層，有更多的微生物生長。從富含有機(jī)物、潮濕、pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。

（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長的菌落數(shù)目。在實際操作中，通常選用一定稀釋范圍的樣品液進(jìn)行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30~300之間、適于計數(shù)的平板。測定土壤中細(xì)菌的數(shù)量，一般選用104105106測定放線菌的數(shù)量，一般選用1010

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（1）實驗室中微生物的篩選應(yīng)用的原理

105

測定真菌的數(shù)量，一般選用1021031（3）微生物的培養(yǎng)與觀察

不同種類的微生物，往往需要不同的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細(xì)菌30~37℃1~2天放線菌25~28℃5~7天霉菌25~28℃3~4天

每隔24小時統(tǒng)計一次菌落數(shù)目，選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致一樓菌落的數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相同的培養(yǎng)基、唯獨及培養(yǎng)時間），同種微生物表現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特征。形狀、大小、隆起程度、顏色疑難解答

（1）如何從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)？

統(tǒng)計某一稀釋度下平板上的菌落數(shù)，最好能統(tǒng)計3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，V代表涂布平板時所用的稀釋液的體積（ml），M代表稀釋倍數(shù)

課題三分解纖維素的微生物的分離

纖維素，一種由葡萄糖首尾相連而成的高分子化合物，是地球上含量最豐富的多糖類物質(zhì)。纖維素與纖維素酶

（1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。

（2）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長提供營養(yǎng)。纖維素分解菌的篩選

（1）篩選方法：剛果紅染色法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對微生物進(jìn)行篩選。（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理

剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。

分離分解纖維素的微生物的實驗流程

土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落（1）土壤采集選擇富含纖維素的環(huán)境。

（2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板（3）剛果紅染色法種類

一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進(jìn)行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時就加入剛果紅。課題延伸

對分解纖維素的微生物進(jìn)行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到的是纖維素分解菌，還需要進(jìn)行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶的實驗，纖維素酶的發(fā)酵方法有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖維素酶的測定方法，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進(jìn)行定量的測定。疑難解答

（1）為什么要在富含纖維素的環(huán)境中尋找纖維素分解菌？

由于生物與環(huán)境的相互依存關(guān)系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含量相對提高，因此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于普通環(huán)境。

（2）將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認(rèn)為濾紙應(yīng)該埋進(jìn)土壤多深？

將濾紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對聚集，實際上是人工設(shè)置纖維素分解菌生存的適宜環(huán)境。一般應(yīng)將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。（3）兩種剛果紅染色法的比較

方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上是纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜問題，缺點是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。（4）為什么選擇培養(yǎng)能夠“濃縮”所需的微生物？

在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些能夠適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物得到迅速繁殖，而那些不適應(yīng)這種營養(yǎng)條件的微生物的繁殖被抑制，因此可以起到“濃縮”的作用。

專題三植物的組織培養(yǎng)技術(shù)課題一菊花的組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)的基本過程

細(xì)胞分化：在生物個體發(fā)育過程中，細(xì)胞在形態(tài)、結(jié)構(gòu)和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。離體的植物組織或細(xì)胞，在培養(yǎng)了一段時間以后，會通過細(xì)胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細(xì)胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細(xì)胞。由高度分化的植物組織或細(xì)胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細(xì)胞的脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生的愈傷組織繼續(xù)進(jìn)行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。再分化形成的試管苗，移栽到地里，可以發(fā)育成完整的植物體。植物細(xì)胞工程

具有某種生物全套遺傳信息的任何一個活細(xì)胞，都具有發(fā)育成完整個體的能力，即每個生物細(xì)胞都具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不表現(xiàn)出來，這是因為在特定的時間和空間條件下，通過基因的選擇性表達(dá)，構(gòu)成不同組織和器官。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)的應(yīng)用有：實現(xiàn)優(yōu)良品種的快速繁殖；培育脫毒作物；制作人工種子；培育作物新品種以及細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。

細(xì)胞分化是一種持久性的變化，它有什么生理意義？

使多細(xì)胞生物體中細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能趨向?qū)ｉT化，有利于提高各種生理功能的效率。比較根尖分生組織和愈傷組織的異同細(xì)胞來源細(xì)胞形態(tài)細(xì)胞結(jié)構(gòu)細(xì)胞排列細(xì)胞去向組織類型根尖分化成多種受精卵正方形無液泡緊密分生組織細(xì)胞組織愈傷組織高度分化細(xì)胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體相同點都通過有絲分裂進(jìn)行細(xì)胞增殖影響植物組織培養(yǎng)的條件材料：不同的植物組織，培養(yǎng)的難易程度差別很大。植物材料的選擇直接關(guān)系到試驗的成敗。植物的種類、材料的年齡和保存時間的長短等都會影響實驗結(jié)果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物的莖上部新萌生的側(cè)枝作材料。一般來說，容易進(jìn)行無性繁殖的植物容易進(jìn)行組織培養(yǎng)。選取生長旺盛嫩枝進(jìn)行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，容易誘導(dǎo)脫分化和再分化。

營養(yǎng)：離體的植物組織和細(xì)胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的要求相對特殊，需要配制適宜的培養(yǎng)基。常用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中含有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg，微量元素是Fe、Mn、B、Zn、Cu、Mo、I、Co，有機(jī)物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。

激素：植物激素中生長素和細(xì)胞分裂素是啟動細(xì)胞分裂、脫分化和再分化的關(guān)鍵性激素。在生長素存在的情況下，細(xì)胞分裂素的作用呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細(xì)胞分裂素等植物激素，其濃度、使用的先后順序、用量的比例等都影響結(jié)果。

使用順序先生長素，后細(xì)胞分裂素先細(xì)胞分裂素，后生長素同時使用

環(huán)境條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。

不同的植物對各種條件的要求往往不同。進(jìn)行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在5.8左右，溫度控制在18~22℃，并且每日用日光燈照射12h.4、操作流程

配制MS固體培養(yǎng)基：配制各種母液：將各種成分按配方比例配制成的濃縮液（培養(yǎng)基母液）。使用時根據(jù)母液的濃縮倍數(shù)，計算用量，并加蒸餾水稀釋。

配制培養(yǎng)基：應(yīng)加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機(jī)物和植物激素的母液，并用蒸餾水定容到1000毫升。

在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素

原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較容易。滅菌：采取的滅菌方法是高壓蒸汽滅菌。MS培養(yǎng)基中各種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些特點？

大量元素和微量元素提供植物細(xì)胞所必需的無機(jī)鹽；蔗糖提供碳源，維持細(xì)胞滲透壓；甘氨酸、維生素等物質(zhì)主要是為了滿足離體植物細(xì)胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的特殊營養(yǎng)需求。微生物培養(yǎng)基以有機(jī)營養(yǎng)為主，MS培養(yǎng)基則需提供大量無機(jī)營養(yǎng)。

外植體的消毒外植體：用于離體培養(yǎng)的植物器官或組織片段。選取菊花莖段時，要取生長旺盛的嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分?jǐn)?shù)為70%的酒精中搖動2~3次，持續(xù)6~7s，

實驗結(jié)果生長素／細(xì)胞分裂素比值與結(jié)果

促根分化，比值高時有利于分裂但不分化抑芽形成

細(xì)胞既分裂也分化分化頻率提高+

比值低時比值適中促芽分化，抑根形成促進(jìn)愈傷組織生長立即將外植體取出，在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1%的氯化汞溶液中1~2min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。注意：對外植體進(jìn)行表面消毒時，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物的耐受能力。接種：接種過程中插入外植體時形態(tài)學(xué)上端朝上，每個錐形瓶接種7～8個外植體。外植體接種與細(xì)菌接種相似，操作步驟相同，而且都要求無菌操作。

培養(yǎng)：應(yīng)該放在無菌箱中進(jìn)行，并定期進(jìn)行消毒，保持適宜的溫度（18~22℃）和光照（12h）移栽：栽前應(yīng)先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，進(jìn)行壯苗。最后進(jìn)行露天栽培。栽培

外植體在培養(yǎng)過程中可能會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌污染；錐形瓶密封性差等。

專題二月季的花藥培養(yǎng)

被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊通常包含花絲、花藥兩部分。花藥為囊狀結(jié)構(gòu)，內(nèi)部含有許多花粉�；ǚ凼怯苫ǚ勰讣�(xì)胞經(jīng)過減數(shù)分裂而形成的，因此，花粉是單倍體的生殖細(xì)胞。被子植物花粉的發(fā)育要經(jīng)歷小孢子四分體時期、單核期和雙核期等階段。在小孢子四分體時期，4個單倍體細(xì)胞連在一起，進(jìn)入單核期時，四分體的4個單倍體細(xì)胞彼此分離，形成4個具有單細(xì)胞核的花粉粒。這時的細(xì)胞含濃厚的原生質(zhì)，核位于細(xì)胞的中央（單核居中期）。隨著細(xì)胞不斷長大，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)（單核靠邊期），并分裂成1個生殖細(xì)胞核和1個花粉管細(xì)胞核，進(jìn)而形成兩個細(xì)胞，一個是生殖細(xì)胞，一個是營養(yǎng)細(xì)胞。生殖細(xì)胞將在分裂一次，形成兩個精子。

注意：①成熟的花粉粒有兩類，一類是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管細(xì)胞核和生殖細(xì)胞核，二核花粉粒的精子是在花粉管中形成的；另一類是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖細(xì)胞就進(jìn)行一次有絲分裂，形成兩個精子，此花粉粒中含有兩個精子核和一個花粉管核（營養(yǎng)核）②花粉發(fā)育過程中的四分體和動物細(xì)胞減數(shù)分裂的四分體不同。花粉發(fā)育過程中的四分體是花粉母細(xì)胞經(jīng)減數(shù)分裂形成的4個連在一起的單倍體細(xì)胞；而動物細(xì)胞減數(shù)分裂過程中的四分體是聯(lián)會配對后的一對同源染色體，由于含有四條染色單體而稱為四分體。③同一生殖細(xì)胞形成的兩個精子，其基因組成完全相同。

產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩種途徑，一種是花粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導(dǎo)分化成植株。這兩種途徑之間并沒有絕對的界限，主要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。注意：①無論哪種產(chǎn)生方式，都要先誘導(dǎo)生芽，再誘導(dǎo)生根②胚狀體：植物體細(xì)胞組織培養(yǎng)過程中，誘導(dǎo)產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成的胚非常類似的結(jié)構(gòu)，其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成的胚類似，有胚芽、胚根、胚軸等完整結(jié)構(gòu)，就像一粒種子，又稱為細(xì)胞胚。

影響花藥培養(yǎng)的因素誘導(dǎo)花粉能否成功及誘導(dǎo)成功率的高低，受多種因素影響，其中材料的選擇與培養(yǎng)基的組成是主要的影響因素

親本的生理狀況：花粉早期是的花藥比后期的更容易產(chǎn)生花粉植株，選擇月季的初花期。合適的花粉發(fā)育時期：一般來說，在單核期，細(xì)胞核由中央移向細(xì)胞一側(cè)的時期，花藥培養(yǎng)成功率最高

花蕾：選擇完全未開放的花蕾

親本植株的生長條件、材料的低溫預(yù)處理以及接種密度等對誘導(dǎo)成功率都有一定影響材料的選取：選擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中的花粉是否處于適宜的發(fā)育期。確定花粉發(fā)育時期的最常用的方法是醋酸洋紅法。但是，某些植物的花粉細(xì)胞核不易著色，需采用焙花青-鉻礬法，這種方法能將花粉細(xì)胞核染成藍(lán)黑色材料的消毒

接種和培養(yǎng)：滅菌后的花蕾，要在無菌條件下除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。在剝離花藥時，要盡量不損傷花藥（否則接種后容易從受傷部位長生愈傷組織），同時還要徹底去除花絲，因為與花絲相連的花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成，通常每瓶接種花藥7～10個,培養(yǎng)溫度控制在25℃左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一般經(jīng)過20～30天培養(yǎng)后,會發(fā)現(xiàn)花藥開裂,長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷組織及時轉(zhuǎn)移到分化培養(yǎng)基上，以便進(jìn)一步分化出再生植株。如果花藥開裂釋放出胚狀體，則一個花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。還需要對培養(yǎng)出來的植株做進(jìn)一步的鑒定和篩選。

植物組織培養(yǎng)技術(shù)與花藥培養(yǎng)技術(shù)的相同之處是：培養(yǎng)基配制方法、無菌技術(shù)及接種操作等基本相同。兩者的不同之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先摸索時期適宜的花蕾；花藥裂開后釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方的要求更為嚴(yán)格。這些都使花藥培養(yǎng)的難度大為增加。

專題五ＤＮＡ和蛋白質(zhì)技術(shù)課題一ＤＮＡ的粗提取與鑒定

提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？

DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；DNA不溶于酒精。

DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度有何特點？要使DNA溶解，需要使用什么濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？

在0.14mol/L時溶解度最��；較高濃度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析出。

在溶解細(xì)胞中的DNA時，人們通常選用2mol/LNaCl溶液；將DNA分子析出的方法是向溶有DNA的NaCl溶液中緩慢注入蒸餾水，以稀釋NaCl溶液。酒精是一種常用有機(jī)溶劑，但DNA卻不能溶于酒精（特別是95％冷卻酒精），但細(xì)胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。

從理論上分析，預(yù)冷的乙醇溶液具有以下優(yōu)點。一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解；二是降低分子運動，易于形成沉淀析出；三是低溫有利于增加DNA分子柔韌性，減少斷裂。采用DNA不溶于酒精的原理，可以達(dá)到什么目的？

將DNA和蛋白質(zhì)進(jìn)一步分離。

提取DNA還可以利用DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。利用該原理時，應(yīng)選用怎樣的酶和怎樣的溫度值？

蛋白酶，因為酶具有專一性，蛋白酶只水解蛋白質(zhì)而不會對DNA產(chǎn)生影響。溫度值為60～80℃，因為該溫度值蛋白質(zhì)變性沉淀，而DNA不會變性。

補(bǔ)充：DNA的變性是指DNA分子在高溫下解螺旋，其溫度在80℃以上，如在PCR技術(shù)中DNA變性溫度在95℃。洗滌劑在提取DNA中有何作用？

洗滌劑將細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細(xì)胞膜。

當(dāng)鑒定提取出的物質(zhì)是否是DNA時，需要使用什么指示劑進(jìn)行鑒定？

在沸水浴條件下，DNA遇二苯胺呈現(xiàn)藍(lán)色。

原理總結(jié)：通過利用不同濃度NaCl溶液溶解或析出DNA，可以從細(xì)胞中提取和提純DNA；再利用酒精進(jìn)一步將DNA與蛋白質(zhì)分離開來，達(dá)到提純的目的；最后利用二苯胺試劑鑒定提取的物質(zhì)是否是DNA。實驗材料的選取

不同生物的組織中DNA含量不同。在選取材料時，應(yīng)本著DNA含量高、材料易得、便于提取的原則。

本實驗用雞血細(xì)胞做實驗材料有兩個原因。一是因為雞血細(xì)胞核的DNA含量豐富，材料易得；二是雞血細(xì)胞極易吸水脹破，而用動物肝臟細(xì)胞作實驗材料常常需要勻漿和離心，對設(shè)備要求較高，操作繁瑣，歷時較長。

雞血細(xì)胞破碎以后釋放出的DNA，容易被玻璃容器吸附，所以在提取過程中為了減少DNA的損失，最好使用塑料的燒杯和試管盛放雞血細(xì)胞液。破碎細(xì)胞，獲取含DNA的濾液

若選用雞血和洋蔥作實驗材料，則怎樣獲取含DNA的濾液？

在雞血細(xì)胞液中加入一定量蒸餾水并用玻棒攪拌，過濾后收集濾液；切碎洋蔥，加入一定量洗滌劑和食鹽，攪拌研磨，過濾后收集濾液。為什么加入蒸餾水能使雞血細(xì)胞破裂？

答：蒸餾水對于雞血細(xì)胞來說是一種低滲液體，水分可以大量進(jìn)入血細(xì)胞內(nèi)，使血細(xì)胞脹裂，再加上攪拌的機(jī)械作用，就加速了雞血細(xì)胞的破裂(細(xì)胞膜和核膜的破裂)，從而釋放出DNA。在以上實驗中，加入蒸餾水、洗滌劑和食鹽的作用分別是什么？過濾時應(yīng)當(dāng)選用（濾紙、尼龍布）。血細(xì)胞在蒸餾水中大量吸水而張裂；洗滌劑瓦解細(xì)胞膜；食鹽溶解DNA物質(zhì)；選用尼龍布進(jìn)行過濾。

在處理植物組織時需要進(jìn)行研磨，其目的是什么？研磨不充分產(chǎn)生什么結(jié)果？

破碎細(xì)胞壁，使核物質(zhì)容易溶解在NaCl溶液中；研磨不充分會使DNA的提取量減少，影響實驗結(jié)果，導(dǎo)致看不到絲狀沉淀物、用二苯胺鑒定不顯示藍(lán)色等。

。具體做法。10mL雞血＋20mL蒸餾水→同方向攪拌→3層尼龍布過濾→濾液去除濾液中的雜質(zhì)

為什么反復(fù)地溶解與析出DNA，能夠去除雜質(zhì)？

用高鹽濃度的溶液溶解DNA，能除去在高鹽中不能溶解的雜質(zhì)；用低鹽濃度使DNA析出，能除去溶解在低鹽溶液中的雜質(zhì)。因此，通過反復(fù)溶解與析出DNA，就能夠除去與DNA溶解度不同的多種雜質(zhì)。

最初獲得的DNA濾液含有蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)，需要進(jìn)一步提純DNA。

方案一的原理是DNA在不同濃度NaCl溶液中溶解度不同；方案二的原理是蛋白酶分解蛋白質(zhì)，不分解DNA；方案三的原理是蛋白質(zhì)和DNA的變性溫度不同。

方案二與方案三的原理有什么不同？答：方案二是利用蛋白酶分解雜質(zhì)蛋白，從而使提取的DNA與蛋白質(zhì)分開；方案三利用的是DNA和蛋白質(zhì)對高溫耐受性的不同，從而使蛋白質(zhì)變性，與DNA分離。析出與鑒定

在濾液中仍然含有一些雜質(zhì)，怎樣除去這些雜質(zhì)呢？得到的DNA呈何顏色？

濾液與等體積的冷卻酒精混合均勻，靜置2～3分鐘，析出的白色絲狀物就是DNA。DNA呈白色。

怎樣鑒定析出的白色絲狀物就是DNA呢？

具體做法。試管2支，編號甲乙→各加等量5mLNaCl溶液→甲中放入少量白色絲狀物，使之溶解→各加4mL二苯胺，混合均勻→沸水浴5min→觀察顏色變化實驗操作

制備雞血細(xì)胞液加檸檬酸鈉，靜置或離心↓

破碎細(xì)胞，釋放DNA加蒸餾水，同一方向快速通方向攪拌↓→過濾，除去細(xì)胞壁、細(xì)胞膜等。

溶解核內(nèi)DNA加入NaCl至2mol/L，同一方向緩慢攪拌↓

DNA析出加蒸餾水至0.14mol/L，過濾，在溶解到2mol/L溶液中↓→除去細(xì)胞質(zhì)中的大部分物質(zhì)。

DNA初步純化與等體積95％冷卻酒精混合，析出白色絲狀物↓→除去核蛋白、RNA、多糖等。

DNA鑒定二苯胺，沸水浴，呈現(xiàn)藍(lán)色

注意事項：在雞血中加入檸檬酸鈉防止凝固；雞血靜置或離心以提高細(xì)胞懸液濃度；使用塑料燒杯；使用尼龍布過濾；玻棒沿同一方向攪拌；玻棒攪拌要緩慢（細(xì)胞破裂快速攪拌）；玻棒不要碰到燒杯壁；二苯胺試劑要現(xiàn)用現(xiàn)配等。

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