生物監(jiān)測(cè)實(shí)訓(xùn)周總結(jié)

生物監(jiān)測(cè)實(shí)訓(xùn)周總結(jié)

生態(tài)0931班

組員：鐘紅梅周曉琴鐘山張宇琛史華杰

測(cè)定項(xiàng)目：蠶豆根尖微核監(jiān)測(cè)技術(shù)測(cè)定時(shí)間：201*/12/２７－３１實(shí)驗(yàn)材料：蠶豆

實(shí)驗(yàn)儀器：顯微鏡、溫箱、恒溫水浴鍋、冰箱、手持計(jì)數(shù)器、鑷子、脫脂棉盤(pán)、解剖針、載玻片、蓋玻片、試劑瓶、青霉素空瓶、燒杯、吸水紙等。

所需溶液：卡偌液、席夫試劑、ＳＯ２洗滌液、洗滌劑４５％的醋酸溶液、。一、實(shí)驗(yàn)步驟；

１．侵種（12月２３日上午）

將蠶豆按需要放入盛有自來(lái)水的燒杯中。置２５℃溫箱內(nèi)，侵泡２６ｈ。

２、催芽（12月２４日上午）

待種子吸脹后，將其放入解剖盤(pán)中，在２５溫度下℃培養(yǎng)２４小時(shí)，待種子初生根２－３ｍｍ時(shí)，選發(fā)芽好的，放入脫脂棉的解剖盤(pán)中。在２５℃催芽４８小時(shí)，出生根長(zhǎng)至２－３ｃｍ時(shí)，進(jìn)行處理。３、處理根尖（12月２７日８：２０）

截取蠶豆的根尖，放入三個(gè)培養(yǎng)皿中，被測(cè)液的濃度分別是，讓被測(cè)液侵住根尖即可。用自來(lái)水作對(duì)照實(shí)驗(yàn)，處理時(shí)間為４ｈ．４、根尖細(xì)胞的恢復(fù)培養(yǎng)（12月２７日１２：２０）

將處理后的種子用自來(lái)水侵洗３次，每次２－３分鐘，然后把洗凈的種子放在濕脫脂棉盤(pán)中，恢復(fù)培養(yǎng)２２－２４ｈ。５、根尖細(xì)胞的固定（12月２８日１２：２0）

將恢復(fù)的種子，從根尖頂端切下１ｃｍ長(zhǎng)幼根放入青霉素空瓶中，加入卡洛液固定２４ｈ，置４℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆�。６、孚爾根染色�?2月２９日１２：２0）

１）固定好的幼根，在青霉素瓶中用蒸餾水侵洗三次，每次５ｍｉｎ．２）洗凈殘水，再加５ｍｏｌ／ｌＨＣＬ將幼根泡住，連瓶放入２８℃水浴鍋中水解幼根２５ｍｉｎ左右，只有跟被軟化為止。３）用蒸餾水侵洗幼根兩次，每次５ｍｉｎ。

４）在暗室或遮光的條件下加席夫試劑，染色１－４ｈ。５）除去染液，用ＳＯ２侵洗液清洗幼根２次，每次５ｍｉｎ。６）用蒸餾水侵洗１次，５ｍｉｎ。

７）將幼根放在新?lián)Q的蒸餾水中，置４℃的冰箱內(nèi)保存，可供隨時(shí)裝片之用。

7、制片（12月３０日８：００）

１）將幼根放在干凈的載玻片上，用解剖針截下１ｍｍ左右的根尖。２）滴上少許４５％的醋酸溶液，用解剖針將根尖搗脆。３）蓋上蓋玻片，注意不要有氣泡。４）再在蓋玻片上加一小塊濾紙。８、鏡檢及微核識(shí)別標(biāo)準(zhǔn)將制好的片子放在顯微鏡下觀察，先用低倍鏡找到分生細(xì)胞區(qū)細(xì)胞分散均勻、膨大、分裂較多的部位，再轉(zhuǎn)高倍鏡觀察。

每一處理觀察２個(gè)根尖。記錄細(xì)胞數(shù)。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)果

蠶豆根尖微核監(jiān)測(cè)記錄表

對(duì)照組序號(hào)１２處理組２處理組１１２１２三、計(jì)算

ＭＣＮ‰＝某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ眨┯^察到的ＭＣＮ數(shù)／某測(cè)試樣點(diǎn)（或?qū)φ眨┯^察到的細(xì)胞數(shù)×１０００‰對(duì)照組：

１、ＭＣＮ‰＝２／１０７３×１０００‰＝１．８６‰２、ＭＣＮ‰＝２／１１３６×１０００‰＝１．７６‰

微核數(shù)２２３２５６觀察的細(xì)胞數(shù)１０７３１１３６１８１１１０１２１３５３１２４６均值＝１．８６‰＋１．７６‰／２＝１．８１‰處理組：

１、ＭＣＮ‰＝３／１８１１×１０００ＭＣＮ‰＝１．６６‰2、ＭＣＮ‰＝２/１０１２×１０００‰=1.98‰均值＝１．６６‰＋１．９８‰／２＝１．８２‰處理組

１、ＭＣＮ‰=５／１３５３×１０００‰＝３．７０‰２、ＭＣＮ‰＝６／１２４６×１０００‰＝４．８２‰均值＝３．７０‰＋４．８２‰／２＝４．２６‰

污染指數(shù)（ＰＩ）＝處理組ＭＣＮ‰平均值／對(duì)照組ＭＣＮ‰平均值處理組１

污染指數(shù)（ＰＩ）＝１．８２‰／１．８１‰＝１．０１

處理組２

污染指數(shù)（ＰＩ）＝４．２６/１．８１‰＝２．３５

四、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

處理組１ＰＩ在０－１．５之間，基本沒(méi)污染。處理組２ＰＩ處于２－３．５之間屬中污染。五、實(shí)驗(yàn)心得

１、對(duì)嚴(yán)重污染的水環(huán)境，監(jiān)測(cè)可能導(dǎo)致根尖死亡，應(yīng)先稀釋再做實(shí)驗(yàn)。

２、根尖催芽時(shí)，溫度應(yīng)保持于２５℃，否則會(huì)影響根尖正常生長(zhǎng)。實(shí)驗(yàn)二

監(jiān)測(cè)項(xiàng)目：總大腸大腸菌群的測(cè)定

實(shí)驗(yàn)器材及試劑：瓶皿、移液管、試管、錐形瓶、恒溫箱、顯微鏡、恒溫培養(yǎng)箱、高壓蒸汽滅菌鍋、電爐、采樣瓶、量杯、導(dǎo)管、酒精燈、接種環(huán)、無(wú)菌水、ＰＨ試紙。

鹽酸、氫氧化鈉溶液、結(jié)晶紫染液、革蘭氏碘液、番紅染液、９５％乙醇

一、實(shí)驗(yàn)步驟：１、１２月２７日

１）制作乳糖蛋白胨培養(yǎng)基、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基２）包扎實(shí)驗(yàn)儀器并滅菌２、１２月２８日

１）在圭塘河的排污口上、中、下游采集水樣。２）對(duì)采集的水樣進(jìn)行稀釋３）進(jìn)行初步發(fā)酵３、１２月２９日

１）平板分離（將初發(fā)酵中產(chǎn)酸產(chǎn)氣及產(chǎn)酸發(fā)酵管接種于伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上，并平板分離。

２）將接種好的瓶皿置于３７攝氏度恒溫箱中培養(yǎng)１８－２４ｈ。４、１２月３０日

１）在伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基上選取符合特征的菌落。（深紫黑色。具有金屬光澤，紫黑色，不帶或略帶金屬光澤的菌落；淡紅色，中心色較深的菌落）

２）對(duì)選出的菌落進(jìn)行涂片，革蘭氏染色，鏡檢。

３）進(jìn)行復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)（將鏡檢菌落為革蘭氏陰性無(wú)芽孢的桿菌挑取一部分接種乳糖蛋白胨培養(yǎng)基，置于３７攝氏度恒溫培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)１８２４小時(shí)。５、１２月３１日

１）對(duì)進(jìn)行復(fù)發(fā)酵的試管進(jìn)行觀察，有產(chǎn)酸產(chǎn)氣者及存在大腸菌群。２）根據(jù)證實(shí)有大腸菌群存在的陽(yáng)性管，并查大腸菌群數(shù)表，報(bào)告每升水樣中的大腸菌群數(shù)。二、實(shí)驗(yàn)結(jié)論

實(shí)驗(yàn)失敗，無(wú)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。三、實(shí)驗(yàn)心得

１）實(shí)驗(yàn)之所以失敗，是因?yàn)槌醢l(fā)酵時(shí)時(shí)間不足，導(dǎo)致時(shí)間時(shí)間完全推遲。

２）加小導(dǎo)管時(shí)，應(yīng)避免產(chǎn)生氣泡。３）整個(gè)實(shí)驗(yàn)應(yīng)遵循無(wú)菌操作。

擴(kuò)展閱讀：周?chē)�微生物檢測(cè)觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

周?chē)�微生物檢測(cè)觀察實(shí)驗(yàn)報(bào)告

汽車(chē)14班張建宇201*010780實(shí)驗(yàn)時(shí)間201*1年10月16號(hào)同組成員：馬躍陳浩

A實(shí)驗(yàn)原理：1.微生物的的分離與純化：從混雜的微生物群體中獲得只含某種或某一株微生物的過(guò)程。根據(jù)微生物對(duì)營(yíng)養(yǎng)，酸堿度，溫度和氧氣的要求條件不同，供給他適宜的培養(yǎng)，或者加入某些抑制劑造成抑制其生存的條件，從而淘汰其他細(xì)菌的生長(zhǎng)，再用稀釋涂布平板法或稀釋后平板劃線分離，純化該微生物，直至得到純的微生物。

2.平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測(cè)樣品竟是當(dāng)d稀世之后。其中的微生物充分分散成單

個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過(guò)培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖而形成肉眼可見(jiàn)的菌落，即一個(gè)菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單一細(xì)胞。統(tǒng)一菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換輸出樣品中的的含菌數(shù)。

平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁雜，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測(cè)定

結(jié)果已受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以活的活菌的信息，所以被廣泛運(yùn)用于生物制品檢驗(yàn)（如活菌制劑），以及食品，飲料和水（包括水源）等的含菌指數(shù)或污染程度。

B實(shí)驗(yàn)材料：菌源:土樣10g牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基12個(gè)1000ul、200ul各一支培養(yǎng)箱

C實(shí)驗(yàn)試劑：生理鹽水,作100倍稀釋用0.9%無(wú)菌生理鹽水250ml三角瓶中裝99ml生理鹽水,每瓶加約20粒玻璃珠250ml三角瓶中99ml實(shí)驗(yàn)用具：平皿;涂棒;無(wú)菌200ul,1000ul吸頭;記號(hào)筆,酒精燈;

D實(shí)驗(yàn)步驟：1.采土樣:

選擇肥沃土壤,去表層土,挖5~20cm深度的土壤數(shù)10g,裝入燒杯,帶回實(shí)驗(yàn)室

2.制備土壤稀釋液;

稱取土樣1.0g，放入盛99ml無(wú)菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，用手振蕩5min使土壤均勻分散成為土壤懸液（10-2）。用1ml的無(wú)菌吸頭從中吸取1ml土壤懸液，注入事先分裝有99ml無(wú)菌水的試管中，吹吸3次，振蕩均勻（10-4）。

3.涂布

用一支的無(wú)菌吸頭，吸取10-4濃度土壤稀釋液100ul，較均勻地放入已寫(xiě)好稀釋度的牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板上，用滅過(guò)菌的無(wú)菌玻璃涂棒涂勻。每個(gè)同學(xué)1個(gè)平板。

4．培養(yǎng)

將牛肉蛋白胨培養(yǎng)基平板倒置于350C溫箱中培養(yǎng)24h；統(tǒng)計(jì)所長(zhǎng)出的菌落數(shù)；

5.菌落計(jì)數(shù)

有較大片菌苔生長(zhǎng)時(shí),棄用,以無(wú)片菌苔生長(zhǎng)的平皿計(jì)數(shù);

若成片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半,其余一半分布均勻,將此一半計(jì)數(shù)*2;6.菌落計(jì)數(shù)

土壤微生物含量=平板平均菌落數(shù)x105

E實(shí)驗(yàn)結(jié)果：

估計(jì)有50-60個(gè)

這是用牙垢畫(huà)的線長(zhǎng)出的菌落，初步

這是泥土中的細(xì)菌長(zhǎng)成的菌落，雖然堆積混亂，但

是根據(jù)若成片菌苔大小不到培養(yǎng)皿的一半,其余一半分布均勻,將此一半計(jì)數(shù)*2的原則。可以數(shù)出大約有120-150個(gè)菌落，折合成土壤微生物含量在1.2-1.5*10^7

這是豆?jié){的菌落圖由于大量菌落堆積，無(wú)法數(shù)清具體數(shù)量。

這是敞口10min的圖片，我們可以清晰的看到10個(gè)菌落。

F實(shí)驗(yàn)討論：1.我的土壤實(shí)驗(yàn)中出現(xiàn)了多個(gè)菌種，其中還有一個(gè)黃色的菌種且擴(kuò)散的很快，說(shuō)明在某一個(gè)相同的生存壞境中，可以同時(shí)存在多個(gè)菌種，也表示了在這些菌種中，生在繁殖的快慢是不一樣的。

2.我的幾乎每一個(gè)平板的一圈都有明顯的污染雜菌，這給我們兩點(diǎn)啟示，其一就是在排除外菌干擾的時(shí)候要特別注意邊緣的清理，其二涂抹實(shí)驗(yàn)物的時(shí)候要涂抹均勻。3.注意一些極易導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差的變量，如實(shí)驗(yàn)過(guò)程中同學(xué)與同學(xué)之間的交流應(yīng)該盡量避免正對(duì)培養(yǎng)皿，同時(shí)試驗(yàn)之前注意洗手（雖然實(shí)驗(yàn)中證明了即使洗手也不會(huì)對(duì)微生物的存在構(gòu)成影響）但是可以保證單一變量的穩(wěn)定，使每個(gè)同學(xué)之間的實(shí)驗(yàn)誤差降低到最低。

4.在放置培養(yǎng)皿的時(shí)候請(qǐng)注意正反面的正確位置，向上的方向注意要是有培養(yǎng)瓊脂的一面，這樣是為了水蒸氣不影響微生物的呼吸作用。

固定化酵母細(xì)胞發(fā)酵啤酒實(shí)驗(yàn)

A實(shí)驗(yàn)原理：1.將生物酶或細(xì)胞固定在一定的基質(zhì)上,從而提供酶或細(xì)胞的利用效率;

2.固定化技術(shù)生產(chǎn)啤酒固定化細(xì)胞能重復(fù)使用;發(fā)酵后菌體與發(fā)酵液易于分離;后處

理工藝簡(jiǎn)單,成本低;可連續(xù)發(fā)酵,過(guò)程自動(dòng)化3包埋法固定化技術(shù)的一種;將微生物細(xì)胞均勻的包埋在水不溶性載體的緊密結(jié)構(gòu)中,細(xì)胞不易漏出;制定固定化細(xì)胞時(shí),細(xì)胞和載體不起任何反應(yīng),細(xì)胞處于最佳生理狀態(tài);固定化細(xì)胞有載體為屏障,可避免外界不利因素的影響。

B實(shí)驗(yàn)儀器材料和用具：啤酒酵母，100ml麥芽汁(8%~10%)/250ml三角瓶，2.5%海藻酸鈉溶

液5ml,滅菌;1.5%CaCl250ml,滅菌;0.9%無(wú)菌生理鹽水,50ml；無(wú)菌滴管;無(wú)菌玻璃棒;無(wú)菌封口膜封好的100ml三角瓶。

C實(shí)驗(yàn)步驟：1.菌體培養(yǎng)

將培養(yǎng)24h的新鮮斜面菌種,接種于三角瓶中培養(yǎng);

2.細(xì)胞固定化

在5mL海藻酸鈉溶液中,加入2ml預(yù)熱至35oC的酵母培養(yǎng)液,混合均勻,以無(wú)菌滴管吸取混合液,滴管口離液面5cm以上,緩慢而穩(wěn)定滴加到CaCl2溶液中,即可得到直徑約3mm左右的凝膠珠;全部滴入.鈣化30min;

3.在無(wú)菌玻璃棒幫助下倒掉CaCl2溶液,倒生理鹽水于制得的固定化好的酵母細(xì)

胞的瓶子中,洗一次凝膠珠,將100mL發(fā)酵培養(yǎng)基（麥芽汁）倒入制得的固定化小球的瓶子中,25℃靜止培養(yǎng)24小時(shí);放置4℃冰箱。4.品嘗啤酒。

D實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論：我們品嘗到了美味的啤酒，但是存在一個(gè)問(wèn)題是麥芽糖液加的

比例過(guò)重導(dǎo)致了啤酒的口味極度偏甜，而且在配制海藻酸鈣溶液的時(shí)候沒(méi)有耐心的擠壓，導(dǎo)致了有一部分的顆粒狀物沒(méi)有充分的與液體接觸，這也可能是實(shí)驗(yàn)結(jié)果不太盡如人意的地方。

酸奶的制作

A實(shí)驗(yàn)原理：發(fā)酵過(guò)程在包裝容器中進(jìn)行，從而使成品因發(fā)酵而保持了凝乳的狀態(tài)。B實(shí)驗(yàn)材料和用具:袋裝巴氏消毒法處理過(guò)的牛奶（此處采用的是三元的牛奶），酸奶菌種。紙杯每人一個(gè)。

C實(shí)驗(yàn)步驟：1.取1000ml的鮮奶攪拌煮沸消毒加白糖60g攪拌溶解，趁熱干凈無(wú)菌的100ml的紙杯中，用潔凈的封口膜將杯口封住。冷卻至40度的時(shí)候?qū)⑹忻嫔系脑�味酸奶�?％的比例倒入融界好糖的牛奶中，攪拌均勻。2.在42度的條件下發(fā)酵培養(yǎng)6－8h的時(shí)間，此間牛奶不要?jiǎng)樱�等待凝固成型的時(shí)候停止發(fā)酵。

3.將酸奶靜置于4攝氏度的冰箱中24h以上。

D實(shí)驗(yàn)結(jié)果和討論：在實(shí)驗(yàn)結(jié)束一天過(guò)后的，我們品嘗到了自己做的酸奶，酸奶的連稠度明顯高于市面上可以買(mǎi)到的酸奶并且口味更加的甜奶味更加的重。由此可以看出市面上的酸奶在原材料的選擇加工運(yùn)輸保存方面可能還存在一些漏洞。通過(guò)這樣一個(gè)簡(jiǎn)單實(shí)驗(yàn)，不僅僅給了我們知識(shí)和提高了我們的動(dòng)手能力，更重要的是，我們認(rèn)識(shí)到了一種理論學(xué)習(xí)與實(shí)踐的方法，那就是在掌握了一定的理論基礎(chǔ)上，我們有能力去進(jìn)行一些動(dòng)手操作的工作，這樣即對(duì)我們認(rèn)識(shí)知識(shí)理解知識(shí)有一定的幫助，同時(shí)也增加了學(xué)習(xí)的樂(lè)趣。其實(shí)生活中一些看起來(lái)比較復(fù)雜的事只是因?yàn)槲覀儧](méi)有細(xì)心的去專研去開(kāi)動(dòng)我們的腦筋，多問(wèn)幾個(gè)為什么多動(dòng)手去做一些有興趣有意義的事，不僅豐富了我們的課余生活，更是一種積極向上的人生態(tài)度。

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