生物實驗總結(jié)(全13個實驗)(網(wǎng)上摘錄+手打)(下)

微生物的實驗室培養(yǎng)

1、選擇培養(yǎng)基

加入青霉素的培養(yǎng)基:

分離酵母菌、霉菌等真菌加入高濃度食鹽的培養(yǎng)基:分離金黃色葡萄球菌不加氮源的無氮培養(yǎng)基:分離固氮菌

不加含碳有機物的無碳培養(yǎng)基:分離自養(yǎng)型微生物

加入青霉素等抗生素的培養(yǎng)基:

分離導(dǎo)入了目的基因的受體細胞加入氨基喋呤、次黃嘌呤和胸腺嘧啶核苷的培養(yǎng)基:分離雜交瘤細胞2、實驗操作

1.制備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于培養(yǎng)細菌）操作步驟

1．計算、稱量2．溶化

將稱號的牛肉膏連同稱量紙一同放入燒杯，加入少量的水，加熱。當(dāng)牛肉膏溶化并與稱量紙分離后，用玻璃棒取出稱量紙。往燒杯中加入稱量好的蛋白胨和氯化鈉，用玻璃棒攪拌，使其溶解。加入瓊脂，加熱使其熔化。在此過程中，不斷用玻璃棒攪拌，防止瓊脂糊底而導(dǎo)致燒杯破裂。當(dāng)瓊脂完全熔化后，補加蒸餾水至100ml。4．滅菌:

將50ml培養(yǎng)基用玻棒轉(zhuǎn)移至三角錐瓶中，塞上棉花塞，包上牛皮紙，再放入高壓蒸氣滅菌鍋，在壓力為100kPa、溫度為121℃，滅菌15～30min。將培養(yǎng)皿用舊報紙包裹，放入干熱滅菌箱內(nèi)，在160～170℃下滅菌2h。5．倒平板:

待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右時，在酒精燈附近倒平板。（倒平板操作見課本）2d后觀察平板，無雜菌污染才可用來接種.

平板劃線法步驟:

用接種環(huán)在平板培養(yǎng)基表面通過分區(qū)劃線而達到純化分離微生物的一種方法。是將微生物樣品在固體培養(yǎng)基表面多次作“由點到線”稀釋而達到分離的目的。用于目的微生物的分離。

涂布平板法。

稀釋平板計數(shù)是根據(jù)微生物在固體培養(yǎng)基上所形成的單個菌落，即是由一個單細胞繁殖而成這一培養(yǎng)特征設(shè)計的計數(shù)方法，即一個菌落代表一個單細胞。計數(shù)時，首先將待測樣品制成均勻的系列稀釋液，盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在（否則一個菌落就不只是代表一個細胞），再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。經(jīng)培養(yǎng)后，由單個細胞生長繁殖形成菌落，統(tǒng)計菌落數(shù)目，即可計算出樣品中的含菌數(shù)。此法所計算的菌數(shù)是培養(yǎng)基上長出來的菌落數(shù)，故又稱活菌計數(shù)。一般用于某些成品檢定（如殺蟲菌劑等）、生物制品檢驗、土壤含菌量測定及食品、水源的污染程度的檢驗。

步驟：

1、將涂布器浸在有酒精的燒杯中。2、取少量菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。

3、將占有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8-10s。

4、用涂布器將菌液均勻的涂布在培養(yǎng)基表面。涂布時可轉(zhuǎn)動培養(yǎng)基，使菌液分布均

勻。

土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)一、篩選菌株

（1）實驗室中微生物的篩選應(yīng)用的原理

人為提供有利于目的菌株生長的條件（包括營養(yǎng)、溫度、pH等），同時抑制或阻止其他微生物生長。

（2）選擇性培養(yǎng)基

在微生物學(xué)中，將允許特定種類的微生物生長，同時抑制或阻止其他種類微生物生長的培養(yǎng)基，稱作選擇培養(yǎng)基。

（3）配制選擇培養(yǎng)基的依據(jù)

根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種的生理代謝特點加入某種物質(zhì)以達到選擇的目的。例如，培養(yǎng)基中不加入有機物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物；培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。二、統(tǒng)計菌落數(shù)目

（1）測定微生物數(shù)量的常用方法有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù)。（2）稀釋涂布平板法統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目的原理

當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。通過統(tǒng)計平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大約含有多少活細菌。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般設(shè)置3～5個平板，選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)，并取平均值。統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，因此，統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表示。三、設(shè)置對照

設(shè)置對照的主要目的是排除實驗組中非測試因素對實驗結(jié)果的影響，提高實驗結(jié)果的可信度。四、實驗設(shè)計

實驗設(shè)計包括實驗方案，所需儀器、材料、用具和藥品，具體的實施步驟以及時間安排等的綜合考慮和安排。

（1）土壤取樣

從富含有機物、潮濕、pH≈7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距地表約3～8cm的土壤層取樣。

（2）制備培養(yǎng)基準(zhǔn)備牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基。在該培養(yǎng)基配方中，為微生物的生長提供碳源的是葡萄糖，提供氮源的的是尿素，瓊脂的作用是凝固劑。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基作為對照，用來判斷選擇培養(yǎng)基是否起到了選擇作用。

（3）微生物的培養(yǎng)與觀察

將土樣以1、101、102……依次等比稀釋至107稀釋度，按照濃度從低到高的順序涂布平板，不必更換移液管。注明培養(yǎng)基種類、培養(yǎng)日期以及平板培養(yǎng)樣品的稀釋度。將涂布好的培養(yǎng)皿放在30℃溫度下培養(yǎng)。隨著培養(yǎng)時間的延長，會有不同的菌產(chǎn)生。比較牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基和選擇培養(yǎng)基中菌落的數(shù)量、形態(tài)等，并做好記錄。

（4）細菌的計數(shù)

當(dāng)菌落數(shù)目穩(wěn)定時，進行計數(shù)。求出平均值，根據(jù)平板所對應(yīng)的稀釋度計算出樣品中細菌的數(shù)目。

在菌落計數(shù)時，每隔24h統(tǒng)計一次菌落數(shù)目。選取菌落數(shù)目穩(wěn)定時的記錄作為結(jié)果，以防止因培養(yǎng)時間不足而導(dǎo)致遺漏菌落的數(shù)目。為了保證結(jié)果準(zhǔn)確，一般選擇菌落數(shù)在30～300的平板進行計數(shù)。

從平板上的菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)的計算方法是（平均菌落數(shù)÷涂布的稀釋液體積）×稀釋倍數(shù)。

結(jié)果分析與評價

對分離的菌種作進一步的鑒定，還需要借助生物化學(xué)的方法。在細菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細菌合成的脲酶將尿素分解成了氨。氨會使培養(yǎng)基的堿性增強，PH升高。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基pH變化來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入酚紅指示劑。培養(yǎng)某種細菌后，如果PH升高，指示劑將變紅，說明該細菌能夠分解尿素。

分解纖維素的微生物的分離

一、纖維素與纖維素酶

（1）棉花是自然界中纖維素含量最高的天然產(chǎn)物，木材、作物秸稈等也富含纖維素。（2）纖維素酶是一種復(fù)合酶，一般認(rèn)為它至少包括三種組分，即C1酶、CX酶和葡萄糖苷酶，前兩種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成葡萄糖，為微生物的生長提供營養(yǎng)。二、纖維素分解菌的篩選

（1）篩選方法

剛果紅染色法。能夠通過顏色反應(yīng)直接對微生物進行篩選。（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣的多糖物質(zhì)形成紅色復(fù)合物，但并不和水解后的纖維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反應(yīng)。當(dāng)我們在含有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物。當(dāng)纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅－纖維素的復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈。這樣，我們就可以通過是否產(chǎn)生透明圈來篩選纖維素分解菌。三、分離分解纖維素的微生物的實驗流程土壤取樣→選擇培養(yǎng)（此步是否需要，應(yīng)根據(jù)樣品中目的菌株數(shù)量的多少來確定）→梯度稀釋→將樣品涂布到鑒別纖維素分解菌的培養(yǎng)基上→挑選產(chǎn)生透明圈的菌落

（1）土壤采集

選擇富含纖維素的環(huán)境。

（2）剛果紅染色法分離纖維素分解菌的步驟倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板（3）剛果紅染色法種類一種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應(yīng)，另一種是在倒平板時就加入剛果紅。

纖維素分解微生物的分離

纖維素酶

種類、作用、最適pH、催化活力

剛果紅染色篩選原理實驗設(shè)計土壤取樣選擇培養(yǎng)涂布培養(yǎng)純化培養(yǎng)前置染色法后置染色法富含纖維素土壤增大分解菌含量染色鑒別分離出分解菌

實驗操作步驟：

1.土樣采集

土樣的采集要選擇富含纖維素的環(huán)境，這是因為在纖維素含量豐富的環(huán)境，通常會聚集較多的分解纖維素的微生物。如果找不到合適的環(huán)境，可以將濾紙埋在土壤中，過一個月左右也會有能分解纖維素的微生物生長。

2.選擇培養(yǎng)

選擇培養(yǎng)需要的儀器有：250mL錐形瓶、無菌稱量瓶、藥匙、1mL和10mL的移液管、天平、搖床、溫度計等。

培養(yǎng)基的制備參照課本旁欄中的比例配制。在250mL錐形瓶中裝入30mL培養(yǎng)基，用8層紗布做成瓶塞，將瓶口塞緊，再在瓶塞外包裹兩層包裝紙（或報紙），用線繩扎緊，在121℃下高壓蒸汽滅菌20min。

選擇培養(yǎng)的操作：稱取土樣20g，在無菌條件下加入裝有30mL培養(yǎng)基的搖瓶中。將搖瓶置于搖床上，在30℃下振蕩培養(yǎng)1～2d，至培養(yǎng)基變混濁。此時可以吸取0.1mL培養(yǎng)液進行梯度稀釋和涂布平板，也可以按課本中所述，重復(fù)選擇培養(yǎng)的步驟一次，然后再進行梯度稀釋和涂布平板。實驗方案流程圖：

選擇培養(yǎng)梯度稀釋

涂布到鑒別纖維素分解菌培養(yǎng)基上

微生物培養(yǎng)土壤取樣

挑選產(chǎn)生透明圈的菌落

純化培養(yǎng)

兩種剛果紅染色法的比較

剛果紅在篩選纖維素分解菌上的應(yīng)用已經(jīng)有超過20年的歷史，在本課題中我們給出了兩種方法。方法一是傳統(tǒng)的方法，缺點是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其優(yōu)點是這樣顯示出的顏色反應(yīng)基本上纖維素分解菌的作用。方法二的優(yōu)點是操作簡便，不存在菌落混雜的問題，缺點是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都含有淀粉類物質(zhì)，可以使能夠產(chǎn)生淀粉酶的微生物出現(xiàn)假陽性反應(yīng)。但這種只產(chǎn)生淀粉酶的微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，因為培養(yǎng)基中纖維素占主要地位，因此可以與纖維素酶產(chǎn)生的透明圈相區(qū)分。方法二的另一缺點是：有些微生物具有降解色素的能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易區(qū)分。染色法優(yōu)點缺點操作繁瑣剛果紅會使菌落之間發(fā)生混雜顏色反應(yīng)基本上是方法一纖維素分解菌的作用操作簡便產(chǎn)生淀粉酶的微生物也產(chǎn)生模糊透明圈，方法二不存在菌落混雜問題有些微生物能降解色素，形成明顯的透明圈。

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探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的動態(tài)變化

一、實驗?zāi)康模?/p>

熟悉探究是有的一般方法、步驟，培養(yǎng)分析、設(shè)計、實施和完善實驗方案的能力；探究培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化，建構(gòu)種群增長的數(shù)學(xué)模型；正確使用顯微鏡。血球計數(shù)板等實驗器材；影響的良好

二、實驗原理：

種群在與環(huán)境相互作用中，處于不斷的變化之中，種群的增長、波動、穩(wěn)定、下降等具體放映種群數(shù)量的動態(tài)變化過程。在理想條件下種群增長可以呈J型曲線，而在實際環(huán)境中，種群的增長一般都是S型曲線，在一個小的密閉環(huán)境中還可能出現(xiàn)衰退和消失。種群數(shù)量的增長受內(nèi)部因素和外部環(huán)境因素影響。種群數(shù)量測定方法--取樣調(diào)查法于種群數(shù)量龐大，對絕對取樣數(shù)量的統(tǒng)計費時、費力。而采用取樣調(diào)查。血球計數(shù)板式一種微生物細胞計數(shù)的常用工具。血球計數(shù)板是一塊特制的厚型載玻片，載玻片上有4條槽而構(gòu)成3個平臺。中間的平臺較寬，其中間又被一短橫槽分隔成兩半，每個半邊上面各有一個計數(shù)區(qū)（圖21-1），計數(shù)區(qū)的刻度有兩種：一種是計數(shù)區(qū)分為16個大方格（大方格用三線隔開），而每個大方格又分成25個小方格；另一種是一個計數(shù)區(qū)分成25個大方格（大方格之間用雙線分開），而每個大方格又分成16個小方格。但是不管計數(shù)區(qū)是哪一種構(gòu)造，它們都有一個共同特點，即計數(shù)區(qū)都由400個小方格組成。計數(shù)區(qū)邊長為1mm，則計數(shù)區(qū)的面積為lmm2，每個小方格的面積為1/400mm2。蓋上蓋玻片后，計數(shù)區(qū)的高度為0.1mm，所以每個計數(shù)區(qū)的體積為0.1mm3，每個小方格的體積為1/4000mm3酵母菌是一種單細胞的真核生物。由于酵母菌具備培養(yǎng)簡單、生長周期短、增值速度快的等特點，是研究種群數(shù)量的變化以及種群內(nèi)部和外部因素對種群個體數(shù)量影響的良好材料

三、探究問題

培養(yǎng)液中酵母菌種群的數(shù)量是怎樣隨時間變化的？四、作出建設(shè)

在有限的環(huán)境條件下，酵母菌種群的數(shù)量隨時間呈S型增長變化。

五、材料用具

酵母菌菌種，無菌馬鈴薯培養(yǎng)液或肉湯培養(yǎng)液，無菌水，試管，棉塞，恒溫培養(yǎng)箱，顯微鏡，無菌滴管，無菌移液管，小燒杯或小試管，血球計數(shù)板(2mm×2mm)、紗布、濾紙、鑷子、蓋玻片等。六、實驗步驟

（1）取相同試管若干支，分別加入5mL肉湯培養(yǎng)液(或馬鈴薯培養(yǎng)液)，塞上棉塞。（2）用高壓鍋進行高壓蒸氣滅菌后，冷卻至室溫，分別標(biāo)記1、2、3等。

（3）將酵母菌母液分別加入試管各5mL，搖勻后用血球計數(shù)板計數(shù)起始酵母菌個數(shù)(No)，做好記錄。

（4）將各試管送進恒溫箱28℃下培養(yǎng)7天。

（5）每天同一時間各組取出本組的試管，用血球計數(shù)板計數(shù)酵母菌個數(shù)，并作記錄，連續(xù)觀察7天。

七、實驗結(jié)果與分析評價（1）結(jié)果

1、根據(jù)表格平均值作出培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量的變化曲線。

2、在有限的環(huán)境條件下，培養(yǎng)液中酵母菌種群數(shù)量隨時間呈是S型增長變化。（2）分析

1、根據(jù)實驗數(shù)據(jù)可得到S型的增長曲線；2、增長曲線的總趨勢是先增加后降低，原因是在開始時，培養(yǎng)液中營養(yǎng)充足、空間充裕、條件適宜，因此酵母菌大量繁殖，種群數(shù)量劇增；隨著酵母菌數(shù)量的不斷增多，營養(yǎng)消耗、PH變化等，使生存條件惡化。八、數(shù)據(jù)記錄表格

計數(shù)試管樣品1樣品2總數(shù)平均數(shù)稀釋倍數(shù)平均×稀釋倍數(shù)第0天第1天第7天A0B0A1B1A7B7渾濁計讀數(shù)估算數(shù)酵母菌細胞總數(shù)計算公式：

①每mL酵母菌細胞個數(shù)＝（所數(shù)100個小格中的細胞總數(shù)÷100）×400×104×稀釋倍數(shù)。②試管內(nèi)酵母菌細胞總數(shù)＝每mL酵母菌細胞個數(shù)×10

不同群落中土壤動物類群豐度的研究

許多土壤動物有較強的活動能力，而且身體微小，因此不適于用樣方法或標(biāo)志重捕法進行調(diào)查。在進行這類研究時，常用取樣器取樣的方法進行采集、調(diào)查。即用一定規(guī)格的捕捉器進行取樣，通過調(diào)查樣本中小動物的種類和數(shù)量來推測某一區(qū)域內(nèi)土壤動物的豐富度。豐富度的統(tǒng)計方法通常有兩種：一是記名計算法；二是目測估計法。記名計算法指在一定面積的樣地中，直接數(shù)出個種群的個體數(shù)目，指一般用于個體較大，種群數(shù)量有限的群落。目測估計法是按預(yù)先確定的多讀等級來估計單位面積上個體數(shù)量的多少。等級的劃分和表示方法有：“非常多、多、較多、較少、少、很少”等等。

土壤中微生物的分解利用

土壤中最小的有機體可能也是最重要的有機體，是那些肉眼看不見的細菌和絲狀真菌。它們有著龐大的天文學(xué)似的統(tǒng)計數(shù)學(xué)，一茶匙的表層土可以含有億萬個細菌�？v然這些細菌形體細微，但在一英畝肥沃土壤的一英尺厚的表土中，其細菌總重量可以達到一千磅之多。長得像長線似的放線菌數(shù)目比細菌稍微少一些，然而因為它們形體較大，所以它們在一定數(shù)量土壤中的總質(zhì)量仍和細菌差不多。被稱之為藻類的微小綠色細胞體組成了土壤內(nèi)極微小的植物生命。

細菌、真菌和藻類是使動、植物腐爛的主要原因，它們將動植物的殘體還原為組成它們的無機物。假若沒有這些微小的生物，像碳、氮這些化學(xué)元素通過土壤、空氣以及生物組織的循環(huán)運動是無法進行的。例如，若沒有固氮細菌，雖然植物被含氮的空氣“海洋”所包圍，但它們?nèi)詫㈦y以得到氮素。其他有機體產(chǎn)生了二氧化碳，并形成碳酸從而促進了巖石的分解。土壤中還有其他的微生物在促成著多種多樣的氧化和還原反應(yīng)，通過這些反應(yīng)使鐵、錳和硫這樣一些礦物質(zhì)發(fā)生轉(zhuǎn)移，并變成植物可吸收的狀態(tài)。土壤內(nèi)含有松散的顆粒、各種有機物、水以及溶于水的各種無機物和空氣，有利于微生物的生存，因此是微生物適宜生長和繁殖的基地。土壤微生物主要聚集在表土層中，它們多以微菌落的形式分布在土壤顆粒和有機物表面及植物根際。土壤中存在許多不同功能的微生物類群，例如，好氧性微生物多生活于土壤表層，并能適應(yīng)較高濃度的有機養(yǎng)料；而在土壤底層則有較多的好氧、厭氧和兼性厭氧微生物。土壤細菌以異養(yǎng)型為主，這些細菌在1g土中的總菌數(shù)一般可達106~109個，生物量超過全部土壤微生物總量的1/4。所以，細菌是土壤微生物中數(shù)量最大、功能最多樣的類群。真菌主要分布在土壤表面的枯枝落葉層和表土層中，在土壤形成和肥力提高過程中起重要作用。

微生物通過分泌細胞外酶，把底物分解為簡單的分子，然后再吸收。細菌通過細胞表面吸收營養(yǎng)物質(zhì)。真菌可以長出菌絲，穿入難以處理的待分解資源。甚至用一般的酶難以分解的纖維素，真菌菌絲體也能分開其弱的氫鍵。大多數(shù)真菌具有分解木質(zhì)素和纖維素的酶，它們能分解植物性有機物；而細菌中只有少數(shù)具有此能力，但在缺氧和一些極端環(huán)境中只有細菌起分解作用。所以細菌和真菌在一起，就能利用自然界絕大多數(shù)有機物和許多人工合成的有機物。

一、提出問題

在本小組內(nèi)交流平時觀察到的有關(guān)現(xiàn)象，比如冬天和春天樹林中落葉層的厚度有沒有差別，春耕時從土壤中翻出的花生果實是什么模樣，還能不能吃，等等。提出自己感興趣的問題，在小組內(nèi)討論，確定本小組要探究的問題。二、作出假設(shè)

根據(jù)自己的已有知識和生活經(jīng)驗，嘗試對提出的問題進行解釋或回答。三、設(shè)計實驗方案

自然界存在著許多不可控制的因素，它們可能影響你的判斷。因此，有關(guān)分解者作用的探究，最好在實驗室進行，這樣可以更好地控制實驗變量。

參考案例

探究土壤微生物對淀粉的分解作用

1．將取自農(nóng)田、林地或花盆等處的土壤放入里面墊有厚紗布的燒杯中，加水?dāng)嚢�，然后將紗布連同土壤一起取出。將留在燒杯中的土壤浸出液靜置一段時間備用。

2．另取兩只燒杯，編號為A、B，放入等量淀粉糊。在A燒杯中加入30mL土壤浸出液，B燒杯中加入30mL蒸餾水。

3．在室溫(20℃左右)下放置7天后，分別取A、B燒杯中的溶液20mL，各放人兩支試管中，分別編號為A1、A2，B1、B2。

4．在A1、B1中加入碘液，在A2、B2中加入斐林試劑。

5．觀察試管中溶液的顏色變化，記錄實驗結(jié)果。通過小組討論，確定本小組的實驗方案。

實驗過程中要注意控制變量，讓實驗組和對照組除自變量以外的條件保持一致。本實驗可能要等幾天甚至幾周以上的時間才出結(jié)果，因此要有計劃地觀察和記錄。

制作泡菜并檢測亞硝酸鹽含量

一、制作泡菜

按照清水與鹽的質(zhì)量比為4：1的比例配置鹽水，將煙水煮沸冷卻。將經(jīng)過預(yù)處理的新鮮蔬菜混合均勻，裝入泡菜壇內(nèi)，裝至半壇時，放入蒜瓣、生姜及其他香辛料，繼續(xù)裝置八成滿，再徐徐注入配置好的鹽水，使鹽水沒過全部菜料，蓋好壇蓋。向壇蓋邊的水槽中注水，以保證壇內(nèi)乳酸菌發(fā)酵所需的無氧環(huán)境。在發(fā)酵過程中要注意經(jīng)常向水槽中補充水。發(fā)酵時間長短受室內(nèi)溫度的影響。二、測定亞硝酸鹽含量1、配置溶液

質(zhì)量濃度為4mg/ml的對氨基苯磺酸溶液：稱取0.4g對氨基苯磺酸，溶解于100ml體積分?jǐn)?shù)為20%的鹽酸中，避光保存。

質(zhì)量濃度為2mg/ml的N1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液：稱取0.2gN1萘基乙二胺鹽酸鹽，溶解于100ml水中，避光保存。

質(zhì)量濃度為5μg、ml的亞硝酸鈉溶液：稱取0.10g于硅膠干燥器中干燥24h的亞硝酸鈉，用水溶解并定容至500ml，再轉(zhuǎn)移5ml溶液至200ml容量瓶中，定容至200ml。

提取劑：稱取50g氯化鎘與50g氯化鈉，溶解于1000ml蒸餾水中，用濃硫酸調(diào)節(jié)ph至1.

1、制備標(biāo)準(zhǔn)顯色液

吸取0.20ml、0．40ml、0．60ml、0.80ml、1.00ml、1.50ml、2.00ml、2.50ml亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)使用液(相當(dāng)于0、1、2、3、5、7、10、12.5微克亞硝酸鈉)，分別置于50毫升比色管中，再去另1支比色管做為空白對照。于標(biāo)準(zhǔn)與樣品管中分別加入2毫升對氨基苯磺酸溶液，混勻，靜置3-5分鐘后各加入1毫升N1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，加水至體積為50ml，混勻，觀察亞硝酸鈉溶液顏色的梯度變化2、制備樣品處理液3、比色

吸取40ml透明澄清的濾液，轉(zhuǎn)移到50ml比色管中，將比色管做好標(biāo)記。按步驟一的方法分別加入對氨基苯磺酸溶液和N1萘基乙二胺鹽酸鹽溶液，并定容至50ml，混勻，靜置15分鐘后，觀察樣品顏色變化，并與標(biāo)準(zhǔn)顯色液比較，找出與標(biāo)準(zhǔn)液最相近的顏色，記錄對應(yīng)的亞硝酸鈉含量，計算。亞硝酸鹽含量計算方法：樣品中亞硝酸鹽含量/取樣量

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